生物素化的分子通常用亲和素/链霉亲和素纯化,然而强亲和力导致生物素化分子的洗脱成为问题,因此生物素化蛋白一般通过酶解后再用质谱鉴定。但是由于缺少生物素化肽段,修饰的位点无法得知。Udeshi等人 在Nature Methods报道了一种用生物素化抗体作为亲和富集试剂的方法,可有效增加生物素肽段的回收率,这种方法比NeutrAvidin等方法更具优势。然而,多个实验室在尝试重复此实验结果时遇到了困难。
经过深入研究,我们发现免疫亲和富集中的洗脱步骤存在问题。基于此,化学生物学平台主管朱奕颖博士对实验步骤进行了改进,大幅度提升了覆盖率以及可重复性,并且进一步采用优越的单克隆抗体作为生物素肽的富集工具。据此,化学生物学平台推出质谱大规模检测生物素化位点的科研服务,此项服务特别适用于检测APEX/BioID临近标记中的作用位点。该项服务的推出将为生物科学研究带来更多可能。
详情请参阅最新发表文章“ Zhu, Y., Improved elution strategy and new monoclonal anti-biotin antibody for LC-MS/MS characterization of protein biotinylation sites. Biochem Biophys Rep, 2024. 38: p. 101711.”